Nebulette CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406565

概要

NEBLは、心筋特異的なZディスクのアクチン結合タンパク質であるネブレット（nebulette）をコードしており、横紋筋において細いフィラメントの配列を整え、サルコメア構造の安定化に寄与します。ネブレットはアクチンフィラメントをZ線の足場構造へ連結し、筋原線維の組み立てや収縮の過程におけるメカノトランスダクションおよび力の伝達に関与します。細胞骨格タンパク質やZディスクタンパク質との相互作用を介して、NEBLは心筋細胞の構造的完全性を支えるとともに、ストレス応答性のリモデリング経路を調節します。NEBLの遺伝的変異や発現異常は心筋症などの心筋疾患と関連付けられており、サルコメア維持や疾患に結び付く細胞骨格破綻の研究において重要な遺伝子です。

Nebulette CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNEBL遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NEBL内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NEBLのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Nebuletteタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Nebuletteシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NEBL欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Nebuletteの機能に不可欠なNEBLエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NEBLゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Nebulette CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNebulette CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NEBL遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Nebulette HDRプラスミド（h）および Nebulette HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNEBLホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNEBL標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。