Plasmide CRISPR/Cas9 KO Nebulette (h): sc-406565
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Nebulette Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Nebulette, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Nebulette Antibody (G-9): sc-393784
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Nebulette (h) | sc-406565 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
NEBL code la nébulette, une protéine de liaison à l’actine spécifique du cœur, localisée au disque Z, qui contribue à organiser les filaments fins et à stabiliser l’architecture des sarcomères dans le muscle strié. La nébulette relie les filaments d’actine aux structures d’échafaudage de la ligne Z et participe à la mécanotransduction ainsi qu’à la transmission de la force lors de l’assemblage des myofibrilles et de la contraction. Par ses interactions avec des protéines du cytosquelette et du disque Z, NEBL soutient l’intégrité structurale des cardiomyocytes et des voies de remodelage sensibles au stress. Des variations génétiques ou une expression dérégulée de NEBL ont été associées à des cardiomyopathies et à des troubles apparentés du muscle cardiaque, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du maintien des sarcomères et des perturbations du cytosquelette liées aux maladies.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Nebulette (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NEBL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NEBL, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NEBL à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Nebulette.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NEBL pour l'étude de la signalisation de Nebulette, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de NEBL essentiels à la fonction de Nebulette
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NEBL pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Nebulette plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Nebulette plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NEBL. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Nebulette plasmide HDR (h) et le Nebulette (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NEBL pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NEBL définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.