Plasmide Double Nickase (h) NDST1: sc-404078-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) NDST1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide NDST1 Double Nickase (h) et le plasmide NDST1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant NDST1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: NDST1 Antibody (FF-2): sc-100790
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) NDST1 | sc-404078-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) NDST1 | sc-404078-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NDST1 (N‑désacétylase/N‑sulfotransférase 1) est une enzyme clé résidente de l’appareil de Golgi qui catalyse les étapes de N‑désacétylation et de N‑sulfatation au cours de la biosynthèse du sulfate d’héparane, façonnant les profils de sulfatation qui déterminent les interactions glycosaminoglycane–protéine. En contrôlant la structure des domaines du sulfate d’héparane, NDST1 module l’organisation de la matrice extracellulaire et la disponibilité des ligands pour des voies telles que les signalisations FGF, WNT, BMP et Hedgehog, influençant l’adhésion et la migration cellulaires ainsi que la formation de gradients de morphogènes. Des altérations de l’activité de NDST1 et de la sulfatation du sulfate d’héparane ont été associées à une dérégulation des programmes développementaux et à un remodelage, lié à des maladies, de la signalisation cellule–matrice. Par conséquent, NDST1 est largement étudiée pour son rôle dans la régulation, médiée par les protéoglycanes, de la signalisation des facteurs de croissance et de l’homéostasie tissulaire.
NDST1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NDST1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NDST1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NDST1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NDST1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.