Plasmide Double Nickase (h) NCoA-3: sc-401496-NIC

NCOA3 code pour le coactivateur 3 des récepteurs nucléaires (NCoA-3/SRC-3), un coactivateur transcriptionnel qui couple les récepteurs nucléaires activés par leur ligand et d’autres facteurs de transcription au remodelage de la chromatine et à la transcription dirigée par l’ARN polymérase II. NCoA-3 intègre les signaux provenant des récepteurs des hormones stéroïdes ainsi que des voies sensibles aux facteurs de croissance en recrutant des histone acétyltransférases et d’autres corégulateurs afin de réguler des programmes géniques contrôlant la prolifération, la différenciation, le métabolisme et les réponses au stress. Par ces fonctions, NCOA3 influence la progression du cycle cellulaire et des réseaux transcriptionnels liés à la signalisation endocrinienne et à la reprogrammation transcriptionnelle oncogénique. Une activité altérée de NCOA3 a été associée à une dérégulation de la signalisation des récepteurs hormonaux et à des phénotypes liés au cancer, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques du contrôle transcriptionnel.

NCoA-3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NCOA3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NCOA3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NCOA3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NCOA3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.