NAT-11 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-413259-ACT

O NAA40 humano codifica a acetiltransferase N-terminal NAT-11, uma enzima da família GNAT mais conhecida por catalisar a Nα-acetilação da histona H4 na serina 1, uma modificação associada à cromatina que ajuda a ajustar programas de transcrição. Ao modular a função dos nucleossomos e a sinalização epigenética, a NAT-11 conecta a química de acetilação dependente de acetil-CoA à regulação do genoma, à progressão do ciclo celular e à expressão gênica relacionada à diferenciação. Alterações na atividade ou na expressão de NAA40 têm sido associadas a estados de cromatina desregulados observados em contextos proliferativos e de resposta ao estresse, o que a torna relevante para estudos de controle epigenético, remodelamento transcricional e assinaturas de expressão gênica associadas a doenças.

NAT-11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NAA40 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NAT-11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NAA40 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NAA40, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NAT-11. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NAA40 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NAT-11 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NAT-11 em células tumorais com expressão de NAA40 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.