Plásmido CRISPR de Activación (h) Na⁺ CP type Vα: sc-402162-ACT

SCN5A codifica la subunidad α formadora del poro del canal de sodio dependiente de voltaje Na⁺ CP tipo Vα (NaV1.5), un determinante clave de la despolarización rápida y del inicio del potencial de acción en células excitables. Al mediar corrientes entrantes de Na⁺, NaV1.5 regula la excitabilidad de la membrana, la velocidad de conducción y el acoplamiento de la actividad eléctrica con el manejo de Ca²⁺ aguas abajo y los procesos de excitación–contracción. La función de SCN5A se integra con redes de homeostasis iónica y vías de señalización que influyen en el tráfico del canal, la compuerta dependiente de fosforilación y la remodelación eléctrica en respuesta al estrés. Las alteraciones genéticas y regulatorias en SCN5A se asocian con susceptibilidad a arritmias hereditarias y adquiridas, lo que lo convierte en un objetivo central para estudios mecanísticos de la dinámica de la corriente de sodio y de fenotipos vinculados a la electrofisiología.

Na+ CP type Vα El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SCN5A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Na+ CP type Vα El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SCN5A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SCN5A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Na+ CP type Vα. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SCN5A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Na+ CP type Vα en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Na+ CP type Vα en células tumorales con expresión de SCN5A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.