Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO NAPRT (h): sc-406144
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- NAPRT Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique NAPRT, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: NAPRT Antibody (B-8): sc-398404
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO NAPRT (h) | sc-406144 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
La NAPRT (nicotinate phosphoribosyltransférase) est une enzyme clé de la biosynthèse du NAD qui catalyse la conversion de l’acide nicotinique en mononucléotide d’acide nicotinique, soutenant la voie de Preiss–Handler. En maintenant les réserves cellulaires de NAD, la NAPRT influence l’homéostasie rédox et l’activité des enzymes dépendantes du NAD impliquées dans le métabolisme, les réponses au stress et la réparation de l’ADN. Une expression ou une activité altérée de la NAPRT a été associée à une reprogrammation métabolique et à des dépendances au recyclage (salvage) du NAD observées dans plusieurs contextes pathologiques, notamment le cancer et les affections inflammatoires. Par conséquent, la NAPRT est fréquemment étudiée dans les voies qui régissent le métabolisme énergétique, la fonction mitochondriale et la résilience cellulaire face au stress génotoxique ou oxydatif.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NAPRT (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NAPRT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NAPRT, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NAPRT à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NAPRT.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NAPRT pour l'étude de la signalisation de NAPRT, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de NAPRT essentiels à la fonction de NAPRT
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NAPRT pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le NAPRT plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NAPRT plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NAPRT. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le NAPRT plasmide HDR (h) et le NAPRT (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NAPRT pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NAPRT définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.