Plasmide CRISPR d'Activation (h) NAG: sc-412223-ACT

Le gène humain **NBAS** code la protéine **NAG**, un composant du complexe d’arrimage **NRZ** qui soutient le trafic rétrograde médié par **COPI** de l’appareil de Golgi vers le réticulum endoplasmique et contribue au maintien de l’homéostasie du RE et du Golgi. Par ses rôles dans l’arrimage des vésicules et le trafic membranaire, NBAS influence le fonctionnement de la voie sécrétoire et la protéostasie cellulaire, avec des effets en aval sur les réponses au stress et le métabolisme. Des altérations génétiques de NBAS ont été associées à des phénotypes multisystémiques, notamment des épisodes récurrents d’insuffisance hépatique aiguë souvent déclenchés par une maladie fébrile, soulignant son importance pour la résilience des hépatocytes et le contrôle de l’homéostasie systémique. Ces propriétés font de NBAS une cible utile pour étudier la dynamique précoce de la voie sécrétoire, la communication entre organites et les programmes transcriptionnels d’adaptation au stress.

NAG Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NBAS sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NAG Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NBAS dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NBAS, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NAG. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NBAS natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NAG au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NAG dans les cellules tumorales présentant une expression de NBAS silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.