N-type Ca++ CP α1B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419401
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- N-type Ca++ CP α1B El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico N-type Ca++ CP α1B, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: N-type Ca++ CP α1B Anticuerpo (A-2): sc-377489
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
N-type Ca++ CP α1B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419401 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Cacna1b codifica la subunidad α1B formadora del poro de los canales de Ca²⁺ tipo N (CaV2.2), un canal de calcio activado por alto voltaje enriquecido en terminales presinápticas, donde acopla la despolarización de la membrana con la entrada de Ca²⁺ y la liberación de neurotransmisores. La actividad de CaV2.2 se integra con la maquinaria de exocitosis de vesículas sinápticas, la señalización de quinasas/fosfatasas dependiente de calcio y las vías de plasticidad sináptica a corto y largo plazo. En modelos del sistema nervioso de ratón, la alteración de la función de CACNA1B se ha vinculado con una excitabilidad neuronal desregulada y una neurotransmisión sensorial alterada, lo que respalda su relevancia para estudios de circuitos del dolor, susceptibilidad a convulsiones y fenotipos neuropsiquiátricos. Dado que CaV2.2 configura microdominios presinápticos de calcio, la perturbación de Cacna1b ofrece una vía directa para estudiar la señalización dependiente de la actividad y la comunicación a nivel de redes neuronales.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO N-type Ca++ CP α1B (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cacna1b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cacna1b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cacna1b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína N-type Ca++ CP α1B.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cacna1b para la investigación de la señalización de N-type Ca++ CP α1B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Cacna1b críticos para la función de N-type Ca++ CP α1B
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cacna1b para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido N-type Ca++ CP α1B CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido N-type Ca++ CP α1B CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cacna1b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR N-type Ca++ CP α1B (m) y el plásmido HDR N-type Ca++ CP α1B (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cacna1b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cacna1b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.