Plasmide CRISPR/Cas9 KO Myotilin (h): sc-406960

Présentation

MYOT code la myotiline, une protéine cytosquelettique localisée au disque Z qui se lie à des composants associés à l’actine afin de soutenir l’organisation du sarcomère et la stabilité mécanique dans le muscle strié. La myotiline participe à la myofibrillogenèse et au maintien de l’architecture du disque Z grâce à des interactions avec des protéines telles que l’α-actinine et la filamine C, influençant la signalisation du cytosquelette et la mécanotransduction. Une altération de la fonction de MYOT est associée aux myopathies myofibrillaires et à d’autres troubles musculaires apparentés, caractérisés par une désintégration du disque Z et une agrégation protéique, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’intégrité musculaire et des réponses au stress. En tant que pôle structural des tissus contractiles, la myotiline est fréquemment étudiée dans les voies impliquées dans la différenciation musculaire, le contrôle qualité des protéines et le remodelage du cytosquelette.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Myotilin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MYOT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MYOT, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MYOT à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Myotilin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MYOT pour l'étude de la signalisation de Myotilin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MYOT essentiels à la fonction de Myotilin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MYOT pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Myotilin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Myotilin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MYOT. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Myotilin plasmide HDR (h) et le Myotilin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MYOT pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MYOT définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.