Plasmide Double Nickase (m) Myosin XVIIIA: sc-436163-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Myosin XVIIIa correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Myosin XVIIIa Double Nickase (m) et le plasmide Myosin XVIIIa Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Myo18a. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Myosin XVIIIa Antibody (H-10): sc-365328
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Myosin XVIIIA | sc-436163-NIC | 20 µg | $410.00 |
Myo18a code pour la myosine XVIIIA, une myosine non conventionnelle qui relie la dynamique du cytosquelette d’actine à l’organisation intracellulaire et à la signalisation. Dans les cellules de souris, la myosine XVIIIA contribue à des processus tels que l’adhérence et la migration cellulaires, ainsi qu’au maintien de l’architecture cellulaire, en coordonnant des complexes associés à l’actine et des interactions de type échafaudage. Un remodelage de l’actine et une signalisation cytosquelettique dérégulés sont largement pertinents pour des phénotypes impliquant des altérations de la motilité, de la polarité et de l’organisation tissulaire, ce qui fait de Myo18a une cible utile pour des études mécanistiques de ces voies. Comme le remodelage du cytosquelette s’interface avec des voies qui influencent la prolifération et les réponses au stress, la perturbation de Myo18a peut aider à disséquer comment les structures dépendantes de l’actine façonnent le comportement cellulaire dans des modèles pertinents pour les maladies.
Myosin XVIIIa Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Myo18a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Myo18a. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Myo18a. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Myo18a.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.