Plasmide CRISPR d'Activation (h) MYBPC3: sc-401409-ACT

MYBPC3 code la protéine C de liaison à la myosine cardiaque (cardiac myosin-binding protein C), une protéine sarcomérique associée aux filaments épais qui module le cycle des ponts actine–myosine et contribue à la cinétique de contraction du muscle strié. Grâce à une régulation dépendante de la phosphorylation et à des interactions au sein de la bande A/zone C, MYBPC3 influence la gestion du calcium, l’assemblage des myofibrilles et les voies de signalisation mécanique qui façonnent la fonction des cardiomyocytes. Des perturbations génétiques et d’expression de MYBPC3 sont fortement associées aux cardiomyopathies héréditaires, en particulier la cardiomyopathie hypertrophique, et sont utilisées pour modéliser le dysfonctionnement du sarcomère et le remodelage inadapté. En tant que régulateur structural spécifique du muscle, MYBPC3 est fréquemment étudié dans des cardiomyocytes dérivés d’iPSC afin de relier la biologie du sarcomère aux réponses au stress et à l’adaptation énergétique.

MYBPC3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYBPC3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MYBPC3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYBPC3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYBPC3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MYBPC3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYBPC3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MYBPC3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MYBPC3 dans les cellules tumorales présentant une expression de MYBPC3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.