Plasmide CRISPR d'Activation (h) MTSS1: sc-404758-ACT

MTSS1 (metastasis suppressor 1) humain code une protéine adaptatrice contenant un domaine I-BAR, qui relie les membranes riches en phosphoinositides aux réseaux régulateurs de l’actine, façonnant la courbure membranaire et coordonnant le remodelage du cytosquelette. MTSS1 intervient dans des processus tels que la dynamique des lamellipodes et des filopodes, l’endocytose et l’adhérence cellule–cellule, via des interactions avec des facteurs associés à l’actine et des voies de signalisation dépendantes de petites GTPases. En modulant la motilité cellulaire et le comportement invasif, MTSS1 est fréquemment étudiée dans le contexte de la différenciation épithéliale, de la progression tumorale et de phénotypes associés aux métastases. Des altérations de l’expression de MTSS1 ont également été liées à des modifications de programmes de développement et à des états transcriptionnels sensibles au stress, pertinents pour la biologie du cancer et des modèles de recherche en neurobiologie.

MTSS1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MTSS1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MTSS1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MTSS1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MTSS1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MTSS1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MTSS1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MTSS1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MTSS1 dans les cellules tumorales présentant une expression de MTSS1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.