Plasmide Double Nickase (h) MTDH: sc-413927-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) MTDH correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MTDH Double Nickase (h) et le plasmide MTDH Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MTDH. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MTDH Antibody (2F11C3D4): sc-517220
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) MTDH | sc-413927-NIC | 20 µg | $410.00 |
MTDH (metadherin/AEG-1) code une protéine d’échafaudage multifonctionnelle qui coordonne des programmes transcriptionnels et post-transcriptionnels liés aux réponses au stress cellulaire, à la survie et à la signalisation inflammatoire. Elle a été impliquée dans l’activation de voies telles que NF-κB et PI3K–AKT, la modulation de la signalisation MAPK, ainsi que la régulation de la traduction des ARNm et de complexes de liaison à l’ARN qui façonnent la protéostasie. MTDH interagit également avec les processus d’adhérence cellulaire et de trafic vésiculaire, influençant la dynamique du cytosquelette et la plasticité cellulaire. Une expression dérégulée de MTDH est fréquemment associée à des réseaux de signalisation oncogéniques et à des phénotypes pertinents pour la progression tumorale, les métastases et la réponse aux traitements, ce qui en fait une cible courante d’études mécanistiques en biologie du cancer.
MTDH Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MTDH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MTDH. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MTDH. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MTDH.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.