MTCL1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403629-ACT

MTCL1 (Microtubule Crosslinking Factor 1) kodiert ein großes, coiled-coil-haltiges Zytoskelettprotein, das Mikrotubuli-Netzwerke organisiert und stabilisiert, indem es Mikrotubuli quervernetzt und ihre Anreicherung um den Golgi-Apparat fördert. Über seine Rolle bei der Verankerung von Mikrotubuli und der Bildung nicht-zentrosomaler Mikrotubuli-Arrays trägt MTCL1 zur Zellpolarität, zum Vesikeltransport und zur gerichteten Migration bei – Prozesse, die eng mit zytoskelettabhängiger Signalgebung und epithelialer Organisation verknüpft sind. Eine fehlregulierte Mikrotubuli-Architektur und veränderte Golgi-Positionierung gehen häufig mit veränderter Proliferation und invasivem Verhalten einher, wodurch die Regulation von MTCL1 für Studien zur Motilität von Krebszellen und zur Gewebemorphogenese relevant ist. MTCL1 wird außerdem als mechanistischer Ansatzpunkt genutzt, um zu untersuchen, wie zytoskelettales Remodeling die Organelldynamik und stressadaptive zelluläre Antworten beeinflusst.

MTCL1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MTCL1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MTCL1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MTCL1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MTCL1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MTCL1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MTCL1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MTCL1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MTCL1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MTCL1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.