Plásmido CRISPR de Activación (m) MsrB3: sc-435729-ACT

Msrb3 codifica la metionina sulfóxido reductasa B3 (MsrB3), una oxidorreductasa de tipo selenoproteína que reduce la metionina-R-sulfóxido de nuevo a metionina, lo que ayuda a preservar la estructura y la función de las proteínas bajo estrés oxidativo. Al apoyar la reparación de metionina y la homeostasis redox, MsrB3 contribuye a la proteostasis celular, a la señalización de respuesta al estrés y al mantenimiento de reservorios funcionales de proteínas secretoras y de membrana. La alteración de la reducción de metionina sulfóxido se ha relacionado con la acumulación de daño oxidativo y con cambios en la resiliencia celular en tejidos metabólicamente activos. En modelos de ratón y en genética comparativa, la disfunción asociada a MSRB3 se ha estudiado en el contexto de fenotipos sensoriales y neurofisiológicos, lo que motiva la investigación de las vías de control redox en tipos celulares relevantes para enfermedades.

MsrB3 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Msrb3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MsrB3 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Msrb3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Msrb3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MsrB3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Msrb3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MsrB3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MsrB3 en células tumorales con expresión de Msrb3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.