Plasmide CRISPR d'Activation (h) MS4A6A: sc-417401-ACT

MS4A6A code un membre de la famille « membrane-spanning 4A » (MS4A), un groupe de protéines de type tétraspanine enrichies dans les lignées hématopoïétiques et myéloïdes. MS4A6A est fréquemment utilisé comme marqueur des états d’activation des microglies et des macrophages, et il est impliqué dans l’organisation membranaire ainsi que dans la régulation de complexes de signalisation à la surface cellulaire qui façonnent les réponses immunitaires innées. L’expression de MS4A6A suit les programmes inflammatoires et des voies associées à l’activation des cellules immunitaires, à la fonction phagocytaire et à des états transcriptionnels induits par les cytokines. Une expression modifiée de MS4A6A a été associée à des phénotypes liés à la neuroinflammation et est couramment étudiée dans le contexte de la génétique des maladies neurodégénératives et de la biologie de la microglie.

MS4A6A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MS4A6A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MS4A6A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MS4A6A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MS4A6A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MS4A6A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MS4A6A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MS4A6A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MS4A6A dans les cellules tumorales présentant une expression de MS4A6A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.