Plasmide CRISPR d'Activation (h) MRP-S18C: sc-412094-ACT

MRPS18C code la protéine ribosomique mitochondriale humaine S18C (MRP‑S18C), un composant de la petite sous-unité 28S du mitoribosome, indispensable à la traduction des polypeptides de la phosphorylation oxydative (OXPHOS) codés par le génome mitochondrial. En soutenant la synthèse des sous-unités de la chaîne respiratoire, MRP‑S18C contribue au maintien de la protéostasie mitochondriale, à l’assemblage de la chaîne de transport des électrons et à la production d’ATP, ce qui la relie à l’homéostasie énergétique cellulaire et aux réponses au stress mitochondrial. Une perturbation de la fonction du mitoribosome peut altérer la traduction mitochondriale et déclencher une signalisation de stress intégrée, avec des effets en aval sur l’équilibre rédox et la reprogrammation métabolique. Ainsi, MRPS18C est pertinent pour l’étude de la dysfonction mitochondriale et des phénotypes observés dans les troubles caractérisés par une bioénergétique compromise.

MRP-S18C Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MRPS18C sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MRP-S18C Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MRPS18C dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MRPS18C, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MRP-S18C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MRPS18C natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MRP-S18C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MRP-S18C dans les cellules tumorales présentant une expression de MRPS18C silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.