Plasmide CRISPR/Cas9 KO MRP-S18B (h): sc-412012

Présentation

MRPS18B code la protéine ribosomique mitochondriale S18B (MRP‑S18B), un composant de la petite sous-unité 28S du mitoribosome des mammifères, indispensable à la traduction des protéines de phosphorylation oxydative (OXPHOS) codées par le génome mitochondrial. En soutenant la synthèse de sous-unités clés de la chaîne de transport d’électrons, MRP‑S18B contribue à la capacité respiratoire mitochondriale, à la production d’ATP et à l’homéostasie redox, ce qui la relie à des voies contrôlant la protéostasie mitochondriale et la signalisation intégrée du stress. Des altérations de la traduction mitochondriale et des déséquilibres de l’OXPHOS sont des caractéristiques récurrentes dans des pathologies touchant des tissus à forte demande énergétique et sont fréquemment observés dans les phénotypes de dysfonction mitochondriale associés au cancer et à la neurodégénérescence. MRPS18B est donc étudié dans des contextes tels que la biogenèse mitochondriale, la reprogrammation métabolique et la coordination nucleo‑mitochondriale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MRP-S18B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MRPS18B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MRPS18B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MRPS18B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MRP-S18B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MRPS18B pour l'étude de la signalisation de MRP-S18B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MRPS18B essentiels à la fonction de MRP-S18B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MRPS18B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MRP-S18B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MRP-S18B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MRPS18B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MRP-S18B plasmide HDR (h) et le MRP-S18B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MRPS18B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MRPS18B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.