Plasmide CRISPR d'Activation (h) MRP-S18A: sc-412466-ACT

MRPS18A code la protéine ribosomique mitochondriale S18A (MRP-S18A), un composant, codé par le noyau, de la petite sous-unité 28S du mitoribosome des mammifères. MRP-S18A soutient la traduction mitochondriale des sous-unités de la phosphorylation oxydative (OXPHOS) codées par l’ADN mitochondrial, influençant ainsi le fonctionnement de la chaîne respiratoire, la production d’ATP et la protéostasie mitochondriale. La perturbation des protéines mitoribosomiques peut altérer l’expression des gènes mitochondriaux, déclencher des réponses intégrées au stress et modifier des signalisations métaboliques qui recoupent l’apoptose et l’homéostasie des espèces réactives de l’oxygène. MRPS18A est donc pertinent pour l’étude de la dysfonction mitochondriale et du remodelage bioénergétique observés dans divers troubles humains, notamment les maladies neurodégénératives et l’adaptation métabolique associée au cancer.

MRP-S18A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MRPS18A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MRP-S18A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MRPS18A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MRPS18A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MRP-S18A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MRPS18A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MRP-S18A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MRP-S18A dans les cellules tumorales présentant une expression de MRPS18A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.