Plasmide CRISPR d'Activation (m2) mPRε: sc-429117-ACT-2

Le gène murin Paqr9 code le récepteur membranaire de la progestérone epsilon (mPRε), un membre de la famille PAQR impliqué dans la signalisation rapide et non génomique de la progestérone au niveau des membranes cellulaires. On pense que mPRε module les sorties de signalisation couplées aux protéines G, influençant des voies de seconds messagers telles que l’AMPc et la dynamique du calcium, qui façonnent la prolifération cellulaire, la différenciation et les réponses au stress dans les tissus sensibles aux hormones. La dérégulation des réseaux de signalisation stéroïdienne associés à Paqr9 a été liée à des altérations de la physiologie reproductive et neuroendocrinienne, et elle est étudiée dans des contextes incluant la biologie des tumeurs hormonodépendantes et l’inflammation métabolique. Des études d’édition génétique et de génomique fonctionnelle ciblant Paqr9 appuient la dissection mécanistique des voies sensibles à la progestérone, du dialogue entre récepteurs et des programmes de signalisation spécifiques de certains types cellulaires dans des modèles murins et des systèmes cellulaires modifiés.

mPRε Le plasmide d'activation CRISPR (m2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Paqr9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

mPRε Le plasmide d'activation CRISPR (m2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Paqr9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Paqr9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de mPRε. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Paqr9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de mPRε au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie mPRε dans les cellules tumorales présentant une expression de Paqr9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.