Plasmide CRISPR d'Activation (h) MMS22L: sc-408097-ACT

MMS22L code une protéine nucléaire qui forme un complexe fonctionnel avec TONSL afin de soutenir la réparation de l’ADN médiée par recombinaison homologue pendant la phase S, en particulier au niveau des fourches de réplication bloquées ou effondrées. En favorisant une réparation couplée à la réplication et le recrutement, sur la chromatine, de facteurs de réparation, MMS22L contribue à la stabilité du génome et à une récupération adéquate après un stress réplicatif. La perturbation des voies dépendantes de MMS22L est associée à une augmentation de la signalisation des dommages à l’ADN, à un traitement anormal des fourches et à une instabilité chromosomique, des processus fréquemment exploités dans les études de biologie du cancer et de maintenance du génome. En tant que facteur de réponse au stress de réplication, MMS22L est couramment étudiée dans le contexte des réseaux de réponse aux dommages à l’ADN, du contrôle du cycle cellulaire et de la sensibilité aux agressions génotoxiques.

MMS22L Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MMS22L sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MMS22L Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MMS22L dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MMS22L, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MMS22L. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MMS22L natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MMS22L au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MMS22L dans les cellules tumorales présentant une expression de MMS22L silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.