MMP9 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400083-ACT

Das humane MMP9 kodiert die Matrix-Metalloproteinase 9, eine sekretierte, zinkabhängige Endopeptidase, die Bestandteile der extrazellulären Matrix wie Kollagen Typ IV abbaut und den Umbau der Basalmembran reguliert. Ihre Aktivität beeinflusst Zellmigration, Angiogenese und den Leukozytentransport, indem sie das perizelluläre proteolytische Milieu formt und matrixgebundene Wachstumsfaktoren und Zytokine freisetzt oder aktiviert. MMP9 ist in inflammatorische Signalnetzwerke und Programme der Organisation der extrazellulären Matrix eingebunden und überschneidet sich mit Signalwegen, die die epithelial-mesenchymale Dynamik und die Gewebereparatur steuern. Eine fehlregulierte Expression und Aktivität von MMP9 wird häufig im Zusammenhang mit Tumorinvasion und Metastasierung, chronisch-entzündlichen Erkrankungen, kardiovaskulärem Remodeling und Neuroinflammation untersucht.

MMP9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MMP9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MMP9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MMP9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MMP9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MMP9-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MMP9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MMP9-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MMP9-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MMP9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.