MLL3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402052-ACT

KMT2C codifica a metiltransferase humana de histona-lisina N MLL3, um regulador de cromatina da família COMPASS que catalisa principalmente a monometilação de H3K4 em enhancers, moldando programas de transcrição específicos de cada tipo celular. A MLL3 coordena a ativação de enhancers com o comprometimento de linhagem, a diferenciação e a expressão gênica responsiva a estímulos, por meio da colaboração com fatores de transcrição e complexos coativadores. Por seu papel no controle epigenético de elementos regulatórios em todo o genoma, KMT2C influencia vias ligadas ao remodelamento de cromatina, às respostas a danos no DNA e à fidelidade transcricional. Alterações genéticas e epigenômicas que afetam KMT2C/MLL3 têm sido associadas a paisagens de enhancers desreguladas observadas em múltiplos contextos de doenças humanas, tornando-o um nó central para estudos mecanísticos de regulação gênica.

MLL3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KMT2C sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MLL3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KMT2C em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KMT2C, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MLL3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KMT2C nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MLL3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MLL3 em células tumorais com expressão de KMT2C silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.