Plasmide CRISPR d'Activation (h) MLK3: sc-401781-ACT

MAP3K11 code la kinase humaine de lignée mixte 3 (MLK3), une MAP3K qui relie divers signaux amont de stress et de cytokines à la signalisation MAPK en aval, notamment les cascades JNK et p38. Par la phosphorylation de MAP2K telles que MKK4/7 et MKK3/6, MLK3 contribue à réguler des programmes transcriptionnels contrôlant l’inflammation, l’apoptose, le remodelage du cytosquelette et la migration cellulaire. L’activité de MLK3 est associée à des réseaux de signalisation en aval de petites GTPases et de voies dépendantes de récepteurs, qui façonnent les réponses cellulaires au stress et les effecteurs de l’immunité innée. Une signalisation MAP3K11/MLK3 dérégulée a été impliquée dans des contextes pathologiques caractérisés par une activation aberrante des MAPK, notamment des adaptations de signalisation oncogénique ainsi que des processus neuro-inflammatoires ou neurodégénératifs.

MLK3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAP3K11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MLK3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAP3K11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAP3K11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MLK3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAP3K11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MLK3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MLK3 dans les cellules tumorales présentant une expression de MAP3K11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.