Plasmide CRISPR/Cas9 KO MLF1IP (h): sc-413208

Présentation

CENPU code la protéine centromérique U (MLF1IP), un composant central du complexe CENP-O/P/Q/U, indispensable à l’assemblage correct du kinétochore et à un attachement stable des microtubules pendant la mitose. MLF1IP favorise une congrégation et une ségrégation fidèles des chromosomes, contribuant au maintien de la stabilité génomique grâce à une progression ordonnée du cycle cellulaire et à des processus associés au point de contrôle du fuseau mitotique. La perturbation ou la dérégulation des facteurs du centromère/kinétochore peut entraîner une mauvaise ségrégation des chromosomes et une aneuploïdie, reliant la fonction de CENPU à des mécanismes couramment associés à des phénotypes de maladies prolifératives. En tant que régulateur mitotique, CENPU est fréquemment étudié dans le cadre du contrôle de la division cellulaire, des voies d’instabilité chromosomique et du remodelage du cycle cellulaire lié au cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MLF1IP (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CENPU dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CENPU, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CENPU à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MLF1IP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CENPU pour l'étude de la signalisation de MLF1IP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CENPU essentiels à la fonction de MLF1IP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CENPU pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MLF1IP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MLF1IP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CENPU. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MLF1IP plasmide HDR (h) et le MLF1IP (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CENPU pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CENPU définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.