Plasmide CRISPR/Cas9 KO mitochondrial ferritin (h): sc-401694
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- mitochondrial ferritin Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique mitochondrial ferritin, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: mitochondrial ferritin Antibody (6G3): sc-517048
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO mitochondrial ferritin (h) | sc-401694 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
FTMT code la ferritine mitochondriale, une protéine de stockage du fer localisée dans la matrice mitochondriale, qui séquestre l’excès de fer et limite la production d’espèces réactives de l’oxygène (ERO) induite par le fer. En tamponnant les pools de fer labile, FTMT influence l’homéostasie rédox mitochondriale, l’intégrité de la phosphorylation oxydative et la réponse cellulaire aux stress métaboliques et oxydatifs. Son activité s’inscrit à l’interface du métabolisme du fer et de la biologie de l’hème et des centres fer–soufre (Fe–S), reliant la fonction mitochondriale à des voies plus larges de gestion du fer. Une expression dérégulée de FTMT a été associée à des modifications de l’accumulation de fer et à des phénotypes de lésions oxydatives pertinents pour la neurodégénérescence, les réponses au stress liées à l’anémie et des modèles de dysfonction mitochondriale.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO mitochondrial ferritin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FTMT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FTMT, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FTMT à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine mitochondrial ferritin.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FTMT pour l'étude de la signalisation de mitochondrial ferritin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de FTMT essentiels à la fonction de mitochondrial ferritin
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FTMT pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le mitochondrial ferritin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le mitochondrial ferritin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FTMT. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le mitochondrial ferritin plasmide HDR (h) et le mitochondrial ferritin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FTMT pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FTMT définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.