MINK1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404966-ACT

MINK1 (misshapen-like kinase 1) codifica uma quinase de serina/treonina da família Ste20 que atua como reguladora a montante (MAP4K) da sinalização MAPK ativada por estresse, particularmente nas vias JNK e p38. Ela integra sinais de adesão celular e da dinâmica do citoesqueleto para modular a polaridade, a migração e a sobrevivência celular por meio do controle dependente de fosforilação de quinases a jusante e de complexos de sinalização organizados por proteínas scaffold. A atividade de MINK1 tem sido associada a desfechos de sinalização inflamatória e a respostas ao estresse celular que influenciam programas de proliferação e apoptose. A desregulação da sinalização de MINK1 tem sido investigada em contextos como invasividade de células tumorais e vias associadas à metástase, bem como em fenótipos mais amplos de neuroimunidade e remodelamento epitelial relevantes para a biologia de doenças.

MINK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MINK1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MINK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MINK1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MINK1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MINK1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MINK1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MINK1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MINK1 em células tumorais com expressão de MINK1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.