Plasmide CRISPR d'Activation (h) MIC2L1: sc-417097-ACT

Le gène humain CD99L2 code la glycoprotéine de surface cellulaire MIC2L1, membre de la famille CD99, impliquée dans l’adhésion intercellulaire et le trafic des leucocytes à travers l’endothélium vasculaire. MIC2L1 est associée à des processus qui modèlent les interactions endothélium–système immunitaire, notamment la régulation de la dynamique des jonctions cellule–cellule et la migration transendothéliale dans des contextes de signalisation inflammatoire. Une expression altérée des molécules de la famille CD99 a été liée à un recrutement dérégulé des cellules immunitaires et à l’inflammation vasculaire, faisant de CD99L2 une cible pertinente pour étudier la surveillance immunitaire, la fonction de barrière et les interactions tumeur–stroma. En recherche, CD99L2 est fréquemment étudié dans des modèles d’infiltration tissulaire inflammatoire et de signaux du microenvironnement influençant la motilité et l’adhésion cellulaires.

MIC2L1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD99L2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MIC2L1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD99L2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD99L2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MIC2L1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD99L2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MIC2L1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MIC2L1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CD99L2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.