Plasmide CRISPR d'Activation (h) MIAT: sc-437346-ACT

MIAT (myocardial infarction associated transcript) est un long ARN non codant humain qui module les programmes d’expression génique en influençant la régulation associée à la chromatine et en agissant comme ARN endogène compétiteur, ce qui façonne la disponibilité des microARN. Il a été impliqué dans la coordination de voies liées au contrôle du cycle cellulaire, à l’apoptose, à la transition épithélio-mésenchymateuse et à la signalisation inflammatoire, affectant ainsi la différenciation cellulaire et les réponses au stress. Une expression dérégulée de MIAT a été rapportée dans de multiples contextes pertinents pour les maladies, notamment le remodelage cardiovasculaire et divers cancers, où elle est corrélée à des modifications des phénotypes de prolifération, d’invasion et d’angiogenèse. En tant que lncARN régulateur, MIAT est fréquemment étudié pour son rôle dans l’architecture des réseaux transcriptionnels et post-transcriptionnels, ainsi que pour l’identification des régulateurs en amont et des gènes effecteurs en aval.

MIAT Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MIAT Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription , où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MIAT. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MIAT au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MIAT dans les cellules tumorales présentant une expression de silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.