mHMGCS Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403941-ACT

HMGCS2 codifica a 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA sintase mitocondrial (mHMGCS), uma enzima limitante da velocidade na cetogênese que catalisa a formação de HMG-CoA a partir de acetoacetil-CoA e acetil-CoA. Essa atividade liga a β-oxidação de ácidos graxos à produção de corpos cetônicos, sustentando a adaptação metabólica durante o jejum e outros estados de baixa glicose. A função da mHMGCS se integra ao metabolismo energético mitocondrial, a programas de sensoriamento de nutrientes e ao controle transcricional de vias lipídicas e oxidativas. A desregulação da expressão de HMGCS2 tem sido associada a alterações na homeostase metabólica hepática e foi estudada em contextos como erros inatos da síntese de corpos cetônicos, fenótipos relacionados à resistência à insulina e reprogramação metabólica na biologia do câncer.

mHMGCS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HMGCS2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

mHMGCS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HMGCS2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HMGCS2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de mHMGCS. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HMGCS2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de mHMGCS no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via mHMGCS em células tumorais com expressão de HMGCS2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.