Plasmide CRISPR/Cas9 KO MFF (h): sc-402756

Présentation

La MFF (mitochondrial fission factor) humaine est un adaptateur de la membrane externe mitochondriale qui recrute la GTPase apparentée à la dynamine DRP1 afin de favoriser la division des mitochondries et des peroxysomes, façonnant ainsi la morphologie et la distribution des organites. En contrôlant l’équilibre entre fission et fusion, MFF influence l’architecture du réseau mitochondrial, la mitophagie, la sensibilité à l’apoptose et la bioénergétique cellulaire, avec des effets en aval sur la phosphorylation oxydative, la gestion des ROS (espèces réactives de l’oxygène) et la signalisation liée au stress. La perturbation de la fission dépendante de MFF est liée à une dynamique mitochondriale altérée et a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, ainsi qu’à des dysfonctionnements métaboliques plus larges lorsque le contrôle qualité des organites est perturbé. En tant que nœud central des voies de la dynamique mitochondriale, MFF est fréquemment étudiée dans les contextes de l’homéostasie des organites, de la signalisation de l’immunité innée et des décisions de destinée cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MFF (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MFF dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MFF, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MFF à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MFF.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MFF pour l'étude de la signalisation de MFF, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MFF essentiels à la fonction de MFF
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MFF pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MFF plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MFF plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MFF. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MFF plasmide HDR (h) et le MFF (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MFF pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MFF définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.