Plasmide Double Nickase (m) METTL3: sc-425096-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) METTL3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide METTL3 Double Nickase (m) et le plasmide METTL3 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Mettl3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) METTL3 | sc-425096-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) METTL3 | sc-425096-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mettl3 code pour METTL3, le cœur catalytique du complexe « writer » de la N6‑méthyladénosine (m6A) de l’ARNm, qui dépose des marques m6A sur des ARN codants et non codants afin de moduler l’épissage, l’export nucléaire, la traduction et la stabilité/dégradation des ARN. Dans les cellules murines, le remodelage de la m6A dépendant de METTL3 s’intègre à des programmes transcriptionnels et à des voies de surveillance des ARN pour orienter les décisions de destinée cellulaire, les réponses au stress et la spécification des lignages. Une activité altérée de METTL3 a été associée à une dérégulation du contrôle épitranscriptomique dans des phénotypes développementaux et des contextes pertinents pour la maladie, notamment la signalisation oncogénique, la régulation immunitaire et la neurobiologie. En tant que régulateur épitranscriptomique central, METTL3 est fréquemment étudié pour relier la méthylation des ARN à des changements, à l’échelle des voies, touchant la prolifération, la différenciation et le métabolisme des ARN.
METTL3 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Mettl3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Mettl3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Mettl3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Mettl3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.