Plasmide CRISPR d'Activation (m) METRNL: sc-431669-ACT

Metrnl code la météorine‑like (METRNL), une protéine sécrétée impliquée dans la communication intercellulaire, qui coordonne l’homéostasie métabolique et des programmes immunomodulateurs dans les tissus périphériques. Dans des modèles murins, l’expression de METRNL est associée au remodelage du tissu adipeux, à la polarisation des macrophages et aux réponses thermogéniques adaptatives, intégrant la détection des nutriments aux signaux inflammatoires. Les activités rapportées relient METRNL à des voies impliquées dans la signalisation des cytokines, les interactions avec la matrice extracellulaire et les processus de réparation tissulaire qui influencent l’équilibre énergétique systémique. La dérégulation de Metrnl a été étudiée dans le contexte de l’inflammation associée à l’obésité, de la résistance à l’insuline et de phénotypes cardiométaboliques, ce qui étaye son intérêt comme nœud pour des études mécanistiques de la biologie des maladies métaboliques.

METRNL Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Metrnl sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

METRNL Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Metrnl dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Metrnl, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de METRNL. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Metrnl natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de METRNL au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie METRNL dans les cellules tumorales présentant une expression de Metrnl silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.