Plasmide Double Nickase (h) Mel-CAM: sc-401020-NIC

MCAM code pour Mel-CAM (CD146), une molécule d’adhérence de la superfamille des immunoglobulines exprimée à la surface des cellules endothéliales ainsi que de certains sous-ensembles de cellules immunitaires et stromales. Mel-CAM participe aux interactions cellule–cellule et cellule–matrice qui influencent le remodelage du cytosquelette, la migration et l’organisation des jonctions, avec des effets en aval sur la biologie vasculaire et le trafic inflammatoire. MCAM a été impliqué dans des processus liés à l’angiogenèse et à des changements phénotypiques de type transition épithélio-mésenchymateuse, en intégrant des signaux de l’environnement extracellulaire pour réguler des programmes associés à la motilité et à l’invasion. Une expression dérégulée de MCAM est fréquemment étudiée dans des modèles de progression tumorale et de métastases, et elle est également pertinente dans la dysfonction vasculaire et la physiopathologie médiée par le système immunitaire.

Mel-CAM Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MCAM dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MCAM. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MCAM. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MCAM.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.