Plasmide Double Nickase (m) Mel-18: sc-423764-NIC

Pcgf2 code Mel-18, une protéine à doigt RING du groupe Polycomb qui agit au sein des complexes PRC1 canoniques pour réguler la compaction de la chromatine et la répression transcriptionnelle via l’ubiquitination de l’histone H2A et en coopération avec la marque H3K27me3 déposée par PRC2. Dans les cellules murines, Mel-18 contribue à des programmes stables de silençage génique qui façonnent l’organisation du développement, l’état des cellules souches et progénitrices, ainsi que le contrôle du cycle cellulaire, en modulant l’accessibilité de loci déterminant la lignée. En influençant des réseaux dépendants de Polycomb, Pcgf2 impacte les trajectoires de différenciation et la mémoire épigénétique, des processus fréquemment perturbés dans des modèles de transformation oncogénique et de dérégulation immunitaire. La perturbation génétique de Pcgf2 est donc utilisée pour disséquer la spécificité des sous-unités de PRC1, les changements de topologie de la chromatine et les sorties transcriptionnelles dépendantes du contexte.

Mel-18 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Pcgf2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Pcgf2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Pcgf2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Pcgf2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.