Plasmide Double Nickase (h) mEH: sc-404239-NIC

L’EPHX1 humain code l’époxyde hydrolase microsomale (mEH), une enzyme associée au réticulum endoplasmique qui hydrolyse des époxydes réactifs en diols moins réactifs, modulant ainsi la façon dont la cellule prend en charge les xénobiotiques et les époxydes lipidiques endogènes. La mEH participe à des réseaux métaboliques de phase I/II qui recoupent les réponses au stress oxydant, l’homéostasie redox et la signalisation inflammatoire, influençant des voies en aval liées à la capacité de détoxification. Les variations d’activité d’EPHX1 sont étudiées dans le contexte de susceptibilités différentielles aux expositions chimiques et de la modulation d’intermédiaires époxydes bioactifs. En recherche biomédicale, EPHX1 est fréquemment analysé pour son impact sur le phénotype métabolique, la tolérance au stress cellulaire et les interactions entre voies de signalisation affectant la signalisation des médiateurs lipidiques.

mEH Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EPHX1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EPHX1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EPHX1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EPHX1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.