Plasmide CRISPR/Cas9 KO MDC (m): sc-422840

Présentation

Ccl22 code la chimiokine « macrophage-derived chemokine » (MDC), un ligand de CCR4 qui favorise la migration dirigée des cellules immunitaires, en particulier des lymphocytes T CD4+ polarisés Th2, des lymphocytes T régulateurs et d’autres leucocytes exprimant CCR4. La MDC est produite par les macrophages, les cellules dendritiques et d’autres populations stromales/immunitaires en réponse à des signaux inflammatoires, modulant le trafic leucocytaire, les réponses induites par les antigènes et la composition immunitaire des tissus. Par une signalisation via les récepteurs de chimiokines qui active des voies dépendantes des GPCR telles que PI3K–AKT et MAPK et qui module la dynamique du cytosquelette, Ccl22 contribue à l’homéostasie immunitaire et aux microenvironnements inflammatoires locaux. Une dérégulation de la signalisation Ccl22/MDC a été associée, dans des modèles murins, à des modifications des profils de recrutement des lymphocytes T, pertinentes pour l’inflammation allergique, l’auto-immunité et les interactions tumeur–immunité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MDC (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ccl22 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ccl22, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ccl22 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MDC.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ccl22 pour l'étude de la signalisation de MDC, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ccl22 essentiels à la fonction de MDC
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ccl22 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MDC plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MDC plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ccl22. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MDC plasmide HDR (m) et le MDC (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ccl22 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ccl22 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.