Plasmide CRISPR d'Activation (h) MCT8: sc-403824-ACT

SLC16A2 code pour le transporteur de monocarboxylates 8 (MCT8), un transporteur membranaire de l’hormone thyroïdienne à haute affinité, exprimé à la surface cellulaire, qui assure l’entrée et la sortie de la triiodothyronine (T3) et de la thyroxine (T4), modulant ainsi la disponibilité intracellulaire des hormones thyroïdiennes. En contrôlant l’accès des hormones aux neurones, aux cellules gliales et à d’autres types cellulaires sensibles, MCT8 contribue à réguler des programmes transcriptionnels dépendants des récepteurs des hormones thyroïdiennes, qui influencent le neurodéveloppement, le métabolisme énergétique et la différenciation cellulaire. Une altération de la fonction de SLC16A2 est associée à une distribution perturbée des hormones thyroïdiennes entre les tissus, avec une forte pertinence pour les phénotypes neurodéveloppementaux et neurologiques, ainsi que pour les modèles de déséquilibre de la signalisation des hormones thyroïdiennes. En recherche, MCT8 est fréquemment étudié dans le contexte du transport membranaire, du dialogue endocrinien et des réseaux d’expression génique en aval pilotés par des voies sensibles à la T3.

MCT8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC16A2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MCT8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC16A2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC16A2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MCT8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC16A2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MCT8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MCT8 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC16A2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.