MCP-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422848

Visão geral

O gene **Ccl8** em camundongos codifica a proteína quimioatraente de monócitos-2 (**MCP-2**), uma quimiocina da família CC que coordena o tráfego de leucócitos ao sinalizar por meio de receptores de quimiocinas como **CCR1**, **CCR2** e **CCR5**. A MCP-2 molda a quimiotaxia inflamatória, regula o recrutamento de células mieloides e contribui para a comunicação cruzada entre os compartimentos imune inato e adaptativo em tecidos lesados ou infectados. A expressão de **Ccl8** é comumente induzida a jusante do **NF-κB** e de programas dependentes de citocinas, conectando o reconhecimento de padrões e a sinalização inflamatória à migração celular. A atividade desregulada de MCP-2 tem sido implicada em estados inflamatórios crônicos, fenótipos autoimunes e infiltração imune associada a tumores, o que a torna relevante para estudos mecanísticos de microambientes imunológicos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO MCP-2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ccl8 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ccl8, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ccl8 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína MCP-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ccl8 para a investigação da sinalização de MCP-2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ccl8 críticos para a função MCP-2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ccl8 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo MCP-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo MCP-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ccl8. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo MCP-2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR MCP-2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ccl8 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ccl8 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.