Plasmide Double Nickase (h) MCM4: sc-402451-NIC

MCM4 code une sous-unité essentielle du complexe hélicase de maintenance des minichromosomes (MCM2–7), qui autorise (licencie) les origines de réplication et assure le déroulement de l’ADN pendant la phase S. Sous le contrôle des voies de signalisation CDK et DDK, MCM4 participe à l’initiation et à l’élongation de la réplication, coordonne la progression des fourches de réplication et contribue à la stabilité du génome en conditions de stress réplicatif. Une altération de la fonction de MCM4 perturbe la synchronisation de la réplication de l’ADN et active des voies de surveillance telles que ATR–CHK1, reliant ainsi MCM4 aux mécanismes qui empêchent l’accumulation de dommages à l’ADN. Une expression modifiée ou un dysfonctionnement de MCM4 a été associé à des phénotypes prolifératifs et à une instabilité génomique pertinents pour la biologie du cancer ainsi que pour des maladies héréditaires touchant la réplication et la réparation de l’ADN.

MCM4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MCM4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MCM4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MCM4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MCM4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.