Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MCM4 Plasmide Double Nickase (h): sc-402451-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MCM4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MCM4 Double Nickase Plasmid (h) e il MCM4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MCM4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MCM4 Antibody (G-7): sc-28317
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MCM4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402451-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MCM4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402451-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MCM4 codifica una subunità centrale del complesso elicasi di mantenimento dei minicromosomi (MCM2–7), che abilita le origini di replicazione e promuove lo svolgimento del DNA durante la fase S. Attraverso la regolazione da parte dei segnali CDK e DDK, MCM4 partecipa all’inizio e all’allungamento della replicazione, coordina la progressione delle forcelle replicative e sostiene la stabilità del genoma in condizioni di stress replicativo. L’alterazione della funzione di MCM4 compromette la tempistica della replicazione del DNA e attiva vie di checkpoint come ATR–CHK1, collegando MCM4 ai meccanismi che proteggono dall’accumulo di danni al DNA. Un’espressione alterata o una disfunzione di MCM4 è stata associata a fenotipi proliferativi e a instabilità genomica rilevanti per la biologia dei tumori e per disordini ereditari della replicazione e riparazione del DNA.
MCM4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MCM4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MCM4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MCM4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MCM4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.