Plasmide CRISPR d'Activation (h) MCM2: sc-400959-ACT

Le gène humain **MCM2** code une sous-unité essentielle du complexe hélicase **MCM2–7**, qui autorise les origines de réplication et assure le déroulement de l’ADN pendant la phase S. La fonction de MCM2 est intégrée à l’assemblage du complexe de pré-réplication, au contrôle des points de contrôle (checkpoints) et aux réponses au stress réplicatif, coordonnées par la signalisation **ATR/CHK1** afin de préserver l’intégrité du génome. Une expression ou une activité altérée de MCM2 est fréquemment associée à une prolifération aberrante, à l’instabilité génomique et à des phénotypes de stress réplicatif observés dans divers contextes de cancers et de maladies hyperprolifératives. En tant que facteur d’autorisation de la réplication, MCM2 est largement utilisé pour étudier la progression du cycle cellulaire, la signalisation des dommages à l’ADN et la dynamique de la réplication associée à la chromatine.

MCM2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MCM2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MCM2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MCM2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MCM2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MCM2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MCM2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MCM2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MCM2 dans les cellules tumorales présentant une expression de MCM2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.