Plasmide CRISPR/Cas9 KO MCAD (m): sc-418938

Présentation

Acadm code la déshydrogénase des acyl-CoA à chaîne moyenne (MCAD), une flavoprotéine mitochondriale qui catalyse la première étape de déshydrogénation de la β-oxydation des acides gras à chaîne moyenne, reliant le catabolisme lipidique à la production d’ATP cellulaire et à l’équilibre rédox. L’activité de la MCAD soutient la flexibilité métabolique pendant le jeûne et lors de fortes demandes énergétiques en alimentant le cycle de l’acide citrique (cycle de Krebs) et la phosphorylation oxydative via l’acétyl-CoA et le transfert d’électrons par l’intermédiaire d’ETF/ETFDH. La perturbation d’Acadm dérègle l’oxydation mitochondriale des acides gras, modifie les profils d’acylcarnitines et peut favoriser des effets secondaires sur les réponses au stress oxydant et les réseaux de signalisation lipidique. La déficience en MCAD est une erreur innée du métabolisme bien caractérisée, associée à une utilisation altérée des acides gras, ce qui fait d’Acadm un nœud pertinent pour l’étude de l’homéostasie métabolique mitochondriale dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MCAD (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Acadm dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Acadm, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Acadm à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MCAD.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Acadm pour l'étude de la signalisation de MCAD, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Acadm essentiels à la fonction de MCAD
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Acadm pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MCAD plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MCAD plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Acadm. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MCAD plasmide HDR (m) et le MCAD (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Acadm pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Acadm définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.