Plasmide CRISPR/Cas9 KO MBOAT1 (h): sc-406397

Présentation

MBOAT1 (membrane bound O-acyltransferase domain containing 1) code une acyltransférase associée au réticulum endoplasmique, impliquée dans le remodelage lipidique par transfert de groupes acyle d’acides gras vers des substrats hydroxylés, influençant ainsi la composition des lipides membranaires et l’homéostasie lipidique cellulaire. En modulant l’équilibre des lipides bioactifs et les propriétés de la membrane, MBOAT1 peut affecter des processus de signalisation liés à la régulation métabolique, à la fonction des organites et aux réponses au stress cellulaire. Des altérations de l’activité des acyltransférases membranaires ont été étudiées dans des contextes tels que la dyslipidémie, la signalisation inflammatoire et la biologie tumorale, où des changements de composition lipidique peuvent remodeler les voies de prolifération et de survie. Ainsi, MBOAT1 constitue une cible utile pour disséquer les mécanismes lipidiques qui relient le remodelage des membranes aux phénotypes cellulaires en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MBOAT1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MBOAT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MBOAT1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MBOAT1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MBOAT1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MBOAT1 pour l'étude de la signalisation de MBOAT1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MBOAT1 essentiels à la fonction de MBOAT1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MBOAT1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MBOAT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MBOAT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MBOAT1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MBOAT1 plasmide HDR (h) et le MBOAT1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MBOAT1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MBOAT1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.