Plásmido CRISPR de Activación (h) Matriptase: sc-402971-ACT

El ST14 humano codifica la matriptasa, una proteasa de serina transmembrana de tipo II que regula la proteólisis pericelular en superficies epiteliales. La matriptasa participa en cascadas de proteasas al activar sustratos como el pro-factor de crecimiento de hepatocitos y otras proteínas extracelulares o asociadas a la membrana, influyendo en procesos que incluyen la homeostasis de la barrera epitelial, la polaridad celular y la remodelación del microambiente local. Al modelar el recambio de la matriz extracelular y la disponibilidad de factores de crecimiento, la actividad de ST14 puede modular vías de señalización vinculadas a la proliferación, la diferenciación y la migración. La expresión desregulada de matriptasa o su actividad proteolítica se ha asociado con la patobiología epitelial y se estudia con frecuencia en contextos de biología del cáncer, inflamación y remodelación tisular.

Matriptase El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ST14 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Matriptase El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ST14 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ST14, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Matriptase. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ST14 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Matriptase en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Matriptase en células tumorales con expresión de ST14 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.