Plasmide Double Nickase (h) Mast Cell Chymase: sc-403686-NIC

CMA1 code la chymase des mastocytes, une protéase à sérine associée aux granules, libérée lors de la dégranulation mastocytaire, qui façonne les réponses inflammatoires et de remodelage tissulaire. Chez l’humain, la chymase contribue au renouvellement de la matrice extracellulaire et à la signalisation locale en clivant divers substrats, notamment des peptides vasoactifs et des précurseurs de cytokines, influençant ainsi des voies liées aux récepteurs activés par les protéases et au système rénine–angiotensine dans le microenvironnement périvasculaire. Une activité de la chymase dérégulée a été associée à l’inflammation allergique et à des processus chroniques de remodelage fibrotique, dans lesquels des protéases d’origine mastocytaire modulent le recrutement leucocytaire, la perméabilité vasculaire et l’activation des cellules stromales. Ainsi, CMA1 est fréquemment étudié en biologie des voies aériennes et cardiovasculaire, dans les réseaux de signalisation fibro-inflammatoires et dans les mécanismes de pathologie induite par les mastocytes.

Mast Cell Chymase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CMA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CMA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CMA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CMA1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.