Plasmide Double Nickase (h) Maspin: sc-416693-NIC

SERPINB5 code la Maspin, un membre atypique de la famille des inhibiteurs de sérine protéases, qui agit comme régulateur dépendant du contexte de l’adhérence des cellules épithéliales, de leur motilité et de leurs interactions avec la matrice extracellulaire. La Maspin influence le remodelage du cytosquelette et les programmes de signalisation cellule–matrice associés à la migration et à l’invasion, et il a été rapporté qu’elle module les réponses au stress oxydatif ainsi que des mécanismes de régulation associés à la chromatine via des interactions avec des partenaires nucléaires et cytoplasmiques. Des modifications de l’expression et de la localisation subcellulaire de SERPINB5 ont été associées à des phénotypes de progression tumorale dans de nombreux types de tissus, ce qui en fait un nœud moléculaire utile pour étudier les mécanismes du comportement cellulaire lié aux métastases. En tant que gène associé à des biomarqueurs en biologie du cancer, SERPINB5 est fréquemment étudié dans des modèles de différenciation épithéliale, d’invasion et de remodelage du microenvironnement.

Maspin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SERPINB5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SERPINB5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SERPINB5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SERPINB5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.