Plasmide CRISPR d'Activation (h) MASP-1: sc-403583-ACT

MASP1 code pour la sérine protéase 1 de la lectine liant le mannose (MASP‑1), une protéase initiatrice clé de la voie des lectines du complément. Lors de la reconnaissance de glucides microbiens par des molécules de reconnaissance de motifs telles que la MBL et les ficolines, MASP‑1 favorise des événements d’activation protéolytique qui amplifient la signalisation du complément et interfèrent avec les cascades de coagulation et d’inflammation. En clivant des substrats en aval et en modulant les réponses endothéliales et leucocytaires, MASP‑1 contribue à coordonner la défense immunitaire innée et la surveillance tissulaire. Une activité dérégulée de la voie des lectines et une expression altérée de MASP1 ont été associées à des processus physiopathologiques inflammatoires et vasculaires, offrant un point d’entrée mécanistique pour étudier, dans des systèmes humains, des processus pathologiques induits par le complément.

MASP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MASP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MASP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MASP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MASP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MASP-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MASP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MASP-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MASP-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de MASP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.