Plasmide Double Nickase (h) MARCH9: sc-410240-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) MARCH9 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MARCH9 Double Nickase (h) et le plasmide MARCH9 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MARCH9. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) MARCH9 | sc-410240-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) MARCH9 | sc-410240-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MARCH9 code une ligase E3 ubiquitine de type RING-CH associée aux membranes, qui se localise dans les compartiments endomembranaires et régule le renouvellement des protéines via un tri et une dégradation dépendants de l’ubiquitine. En catalysant l’ubiquitination de certaines protéines membranaires, MARCH9 contribue au trafic endocytaire, à l’adressage lysosomal et aux processus de contrôle qualité qui modulent la disponibilité des récepteurs et la dynamique de la signalisation intracellulaire. Ces activités relient MARCH9 à des voies impliquées dans la régulation de protéines membranaires liées à l’immunité et dans l’homéostasie cellulaire, où une altération de la fonction de ligase ubiquitine peut influencer les réponses au stress et le remodelage du protéome de surface cellulaire. La dérégulation de l’ubiquitination et du trafic des protéines membranaires est pertinente pour les études mécanistiques de la signalisation immunitaire, des réponses de l’hôte associées aux infections et, plus largement, des perturbations de la protéostase observées dans divers contextes pathologiques.
MARCH9 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MARCH9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MARCH9. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MARCH9. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MARCH9.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.