Plasmide CRISPR d'Activation (m) MAPKAPK-2: sc-421557-ACT

Le gène murin Mapkapk2 code la MAPKAPK-2 (MK2), une kinase sérine/thréonine qui constitue un effecteur clé de la voie de réponse au stress p38 MAPK. Une fois activée, MK2 phosphoryle des substrats tels que HSPB1 et la tristetraproline (ZFP36), remodelant les programmes de stabilité et de traduction des ARNm et coordonnant la production de cytokines inflammatoires, la dynamique des granules de stress et le remodelage du cytosquelette. En contrôlant la signalisation de l’immunité innée, les points de contrôle du cycle cellulaire et l’apoptose en conditions de stress, la MAPKAPK-2 contribue à des processus modélisés expérimentalement, notamment les mécanismes des maladies inflammatoires, les réponses aux lésions tissulaires et la signalisation du microenvironnement associé aux tumeurs. Sa position dans la voie en fait un nœud utile pour disséquer la régulation transcriptionnelle et post-transcriptionnelle dépendante de p38 dans des cellules murines primaires et transformées.

MAPKAPK-2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Mapkapk2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MAPKAPK-2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Mapkapk2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Mapkapk2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MAPKAPK-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Mapkapk2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MAPKAPK-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MAPKAPK-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de Mapkapk2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.