Particules Lentivirales d'Activation (h) MANEA: sc-413213-LAC

Le gène humain **MANEA** code une endo-α-mannosidase, une glycosidase localisée dans l’appareil de Golgi qui permet une voie alternative de maturation des glycoprotéines N-liées en éliminant des N-glycanes à haut mannose glucosylés. Cette activité s’articule avec le contrôle qualité du réticulum endoplasmique (RE) et avec les étapes de traitement ultérieures de la voie sécrétoire en coordonnant le remodelage des glycannes, ce qui influence le repliement, le trafic intracellulaire et la stabilité des protéines. Par son rôle dans l’homéostasie des glycoprotéines, MANEA affecte les réseaux cellulaires de protéostasie et peut moduler la prise en charge de récepteurs et d’enzymes glycosylés. Des altérations des voies de N-glycosylation ont été associées à des troubles congénitaux de la glycosylation ainsi qu’à des phénotypes pathologiques plus larges impliquant le mauvais repliement des protéines et des réponses au stress, ce qui fait de MANEA un nœud pertinent pour des études mécanistiques.

Les particules d'activation lentivirales MANEA (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de MANEA dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales MANEA (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription MANEA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de MANEA. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif MANEA ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.